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葡聚糖基質凝膠過濾層析介質樹脂填料

描述:葡聚糖基質凝膠過濾層析介質樹脂填料Smartdex G-10 蛋白分離:Smartdex G-10系列介質是一類以葡聚糖為基質的凝膠過濾層析(gel filtration chromatography)介質,其工作原理主要是利用具有網狀結構的葡聚糖凝膠的分子篩作用,根據被分離物質的分子大小不同來進行分離。

更新時間:2024-06-18
產品型號:Smartdex G-10 蛋白分離
廠商性質:經銷商
詳情介紹

葡聚糖基質凝膠過濾層析介質樹脂填料Smartdex G-10 蛋白分離

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Smartdex G-10系列介質是一類以葡聚糖為基質的凝膠過濾層析(gel filtration chromatography)介質,其工作原理主要是利用具有網狀結構的葡聚糖凝膠的分子篩作用,根據被分離物質的分子大小不同來進行分離。

  葡聚糖凝膠是一種具有三維網狀結構的高分子化合物,它是由葡聚糖加入交聯劑通過醚鍵互相交聯聚合而成的,交聯度越大,網孔結構就越緊密,吸水后的體積膨脹就越小,能允許進入凝膠內部的分子的分子量也就越小,反之亦然。層析時,大于凝膠孔徑的大分子,被阻于凝膠相外,沿著凝膠顆粒之間的間隙走,下移速度最快,故最先洗脫下來,中分子物質部份進入凝膠內部,洗脫速度為其次,而小分子物質因全部進入凝膠,受到阻力大,故最后被洗脫下來,如此物質得到分離。

   型號G表明每克于凝膠吸水量的多少,例如G-10表明每克干凝膠吸水1.0克。這表征了凝膠所能膨脹的倍數,亦間接表征了凝膠孔徑的大小。


表1.Smartdex G-10產品性能

項目

性能

顆粒大小 (干)

100-200目

分離范圍 (球蛋白)

<7×102 Da

溶脹體積(ml濕膠/g干粉)

2.0-3.0

pH穩定性

pH 2-13

2.裝柱說明


2.1凝膠的預處理

Smartdex G-10 為于粉,初次使用前必須進行預處理。溶脹過程中嚴禁使用磁力攪拌,以免使微球破碎。

加入足夠的水或緩沖液進行溶脹,室溫3h 以上或水浴 90℃、1h。如果室溫溶脹則需要進行真空脫氣,然后將溶脹好的微球按照3∶1(v/v)加入水或緩沖液攪拌使其形成均勻的75%膠懸液。如果是重復使用的可以將 20%乙醇傾去,加水或緩沖液攪拌均勻成75%的膠懸液。

2.2 Smartdex G-10 的裝填

2.2.1重力柱的裝填

1)取合適規格的重力層析柱,裝入下墊片,加入適量純水潤洗柱管和墊片,關閉下出口。

2)將溶脹好的介質混合均勻,用槍頭吸取適量漿液加入至重力柱中(介質實際體積占懸液的75%),打開下出口流干保護液。3)加入適量純水沖洗介質,待柱管中液體重力流干后,關閉下出口。4)裝入潤洗后的上墊片,確保墊片與填料之前沒有空隙,且保持水平。

5)裝填好的重力柱可以直接加入平衡液進行平衡,暫不使用時則加入保護液,4-30℃保存。

2.2.2 層析柱的裝填

裝柱前根據層析柱直徑計算柱子底面積,根據所需裝柱高度計算所需介質體積,公式如下∶

V=1.15mh

V∶所需介質體積 ml 1.15∶壓縮系數r∶柱管半徑 cm h∶裝填高度 cm

注意∶介質實際體積占所取懸液總體積的 75%。

1)用去離子水沖洗層析柱底篩板與接頭,確保柱底篩板上無氣泡,關閉柱底出口,并在柱底部留出1-2cm 的去離子水。2)將填料懸浮起來,小心的將漿液連續地倒入層析柱中。用玻璃棒沿著柱壁倒入漿液可減少氣泡的產生。


3)如果使用儲液器,應立即在層析柱和儲液器中加滿水,將進樣分配器放置于漿液表面,連接至泵上,避免在分配器或進樣管中產生氣泡。4)打開層析柱底部出口,開啟泵,使其在設定的流速下進行。最初應讓緩沖液緩慢流過層析柱,然后緩慢增加至最終流速,這樣可避免液壓對所形成柱床的沖擊,也可以避免柱床形成的不均勻。如果達不到推薦的壓力或流速,可以用你所使用泵的最大流速,這樣也可以得到一個很好的裝填效果。(注意∶在隨后的色譜程序中,不要超過最大裝柱流速的75%)當柱床高度穩定后,在最后的裝柱流速下至少再上3 倍柱床體積的去離子水。標上柱床高度。5)關閉泵,關閉層析柱出口。

6)如果使用儲液器,去除儲液器,將分配器置于層析柱中。

7)將分配器推向柱子至標記的柱床高度處。允許裝柱液進入分配器,鎖緊分配器接頭。8)將裝填好的層析柱連接至泵或色譜系統中,開始平衡。如果需要可以重新調整分配器。

葡聚糖基質凝膠過濾層析介質樹脂填料Smartdex G-10 蛋白分離過程


3.1 緩沖液的準備

所用水和緩沖液在使用之前建議用0.22 μm 或0.45 um 濾膜過濾。

平衡液為蛋白純化后,用干保護蛋白的溶液(例如;PBS等),根據客戶需求自行選擇。

3.2 樣品準備

樣品在上樣前建議離心或用0.22 μm 或0.45 μm 濾膜過濾,減少雜質,防止堵塞柱子。

3.3 樣品純化1平衡

上樣之前,用平衡液至少平衡 5-10個柱體積,或直到基線穩定。含去垢劑的溶液可能需要平衡更長時間。2)上樣和洗脫

推薦上樣體積為柱體積的 10%以內。脫鹽時最大樣品量可至 30%柱體積。使用重力柱純化時。待樣品進入填料后,繼續加入平衡液進行洗

脫,使用預裝層析柱純化時,可以通過上樣管或樣品環來上樣。分管收集洗脫液,樣品進入填料開始,按昭固定體積(例如 1ml/管)收集

樣品,檢測每管蛋白濃度和鹽濃度,計算回收率和脫鹽效率。預裝層析柱純化流速最高不能超過裝柱流速的 70%。

凝膠過濾是一種非吸附性色譜技術,所有的樣品物質都應在一個柱體積之內洗脫出來。完成一次操作后,如仍用同一種緩沖液,色譜柱不需要再平衡。3)再生

再生通常用水沖洗2 倍柱體積,然后用緩沖液沖洗2-3倍柱體積,如果不立刻使用,則用20%乙醇平衡后,4-30℃C保存。對不同的樣品,建議大約5次循環后,采用完整的在位清洗(CIP)。

4.清洗及保存

在位清洗∶為除去變性蛋白或脂肪,有時需要對脫鹽柱進行原位清洗。常用的清洗液為0.1-0.2 M NaOH 或非離子型去垢劑。

1)加入一倍的柱體積0.1-0.2 M NaOH,依靠重力或者低流速清洗介質。

2)用足夠量的去離子水,沖洗介質,直至 pH 值至中性。

3)用至少三倍柱體積 20%乙醇溶液沖洗介質,然后做好色譜柱的密封,置于2-8℃保存。

注∶不建議介質多次重復再生和使用。

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蘇州阿爾法生物提供的瓊脂糖凝膠介質、葡聚糖凝膠介質等蛋白純化和分離填料以及相關生物試劑。另外還提供、氨酸標簽蛋白親和純化介質、GST-tag蛋白親和純化介質、 MBP-tag蛋白親和純化介質、Biotin-tag蛋白親和純化介質、Strep-tagll標簽親和純化介質、 標簽抗體親和純化介質等標簽蛋白親和層析介質; 離子交換層析 、色譜柱、離子交換層析樹脂、疏水層析介質、 磁性微球等。

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